طراحی و ساخت وکتور نوترکیب merB به منظور پاکسازی زیستی جیوه آلی

متیل جیوه یکی از فرم های پایدار جیوه آلی است که می­ تواند وارد زنجیره غذایی موجودات زنده گردد و خطرات زیست محیطی جبران­ ناپذیری را برای اکوسیستم طبیعی بوجود آورد. پایداری جیوه و هزینه زیاد روش های مرسوم پالایش عوامل نگران کننده ­ای هستند. در این رابطه، روش­ های بیولوژیکی مانند استفاده از بیو­راکتورهای مبتنی بر باکتری ها یا آنزیم ­های آنها بعنوان یکی از روش های میکروب پالایی راه حلی پایدار، کم هزینه و دوست دار محیط زیست ارایه می­ دهد. در این پژوهش ژن merB از باکتری Serratia marcescens مناطق آلوده به جیوه جداسازی شده و سپس جهت کلونینگ در وکتور بیانی، با آنزیم های NcoI / NdeIبرش داده شد و پس از خالص سازی، به وکتور بیانی   pET28a(+) الحاق صورت گرفت. وکتور نوترکیب pET28(a+)-merB به باکتری E.coli  سویه TOP10 منتقل و در آن تکثیر شد. سپس روی کلنی ­های رشد یافته درمحیط گزینشی کانامایسین واکنش زنجیره ای پلیمراز روی کلنی ها صورت گرفت. واکنش زنجیره ای پلیمراز روی پلاسمید با آغازگرهای اختصاصی ژن انجام و پس از تایید با هضم آنزیمی پلاسمید برای تعیین توالی ارسال شد. نتایج به ­دست آمده صحت همسانه­ سازی ژن­ merB را در وکتور بیانی نشان داد. این وکتور نوترکیب به ­منظور بیان پروتئین مورد نظر به باکتری E. coli سویه BL21(DE3) منتقل و بیان پروتئین مورد نظر با کاربرد روش SDS-PAGE تایید شد. در نهایت عملکرد پروتئین MerB در محیط حاوی جیوه بررسی و نتایج بیانگر افزایش مقاومت به جیوه در باکتری­ های نوترکیب به­ دست آمده بود. به کمک این سیستم و با تولید آنزیم MerB می­توان از طریق روش­ های مختلف زیست پالایی اقدام به پاکسازی جیوه از مناطق آلوده نمود.